教材 · 生物 · 遗传信息的表达与发生 · DNA 与遗传信息的表达
DNA 的结构与半保留复制
DNAの構造と半保存的複製
DNA 是两条反向平行的核苷酸链,A 与 T、G 与 C 互补配对;复制时每条旧链各作模板,新分子含一旧一新两条链(半保留复制)。梅塞尔森–斯塔尔实验中,第 1 代全为中间带、第 2 代中与轻各半,正是这一方式的证据。
细胞每分裂一次,就要把整套 DNA 几乎一个碱基不差地复制一遍,人的一套基因组约有 30 亿个碱基对。这么长的序列靠什么抄得这么准?答案就写在 DNA 的结构里:两条链互为模板,看见一条,另一条就确定了。
为什么是这样
DNA 是核苷酸(ヌクレオチド)连成的长链,每个核苷酸由脱氧核糖、磷酸和一个碱基组成,碱基有 A、T、G、C 四种。糖与磷酸交替相连构成骨架,碱基朝向内侧,两条链之间靠碱基的氢键相连:A 只与 T、G 只与 C 配对(相補性),整体扭成双螺旋(二重らせん構造,沃森和克里克于 1953 年提出)。两条链的方向相反,一条为 5′→3′,对面一条为 3′→5′。
互补配对的直接结果是:一条链的序列决定了另一条链。复制时 DNA 解旋酶把双链解开,两条旧链各当模板,DNA 聚合酶按配对规则把核苷酸一个个接上去。得到的两个 DNA 分子各含一条旧链和一条新链,这就是半保留复制。
DNA 聚合酶只能把核苷酸接在链的 3′ 端,并且需要一小段引物(プライマー)起头,所以新链只能沿 5′→3′ 延长。顺着解链方向的那条新链可以连续合成(先导链);另一条只能一小段一小段地反向合成,这些短片段叫冈崎片段,最后由 DNA 连接酶连成一条(滞后链)。
定量表达
配对规则直接给出夏格夫规则(シャルガフの規則):双链 DNA 中 A=T、G=C,因此 A+G=T+C,嘌呤(A、G)与嘧啶(T、C)各占一半。已知 A 占 30%,就有 T 为 30%、G 与 C 各为 20%。这个规则只对双链整体成立;单看一条链,A 与 T 的数目不必相等。
梅塞尔森与斯塔尔用大肠杆菌验证了半保留复制。先在只含 ¹⁵N 的培养基中培养多代,使 DNA 全部变「重」;再移到 ¹⁴N 培养基,每分裂一次取 DNA 做密度梯度离心。按半保留复制,一个原始分子复制 n 次得到 2n 个分子,其中始终只有 2 个各含一条 ¹⁵N 旧链(中间密度),其余全是轻的,所以中与轻的比为 2:(2n−2):第 1 代全为中,第 2 代为 1:1,第 3 代为 1:3。
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